Detection of equine herpesvirus 1 and 4 and its association with latency-associated transcripts in naturally infected horses in Colombia / Detección de los herpesvirus equinos 1 y 4 y su relación con transcriptos asociados a la latencia en caballos infectados naturalmente en Colombia

ABSTRACT Objective. Determine the presence of antibodies and viral genomes of EHV-1 and EHV-4, as well as to detect the presence of latency associated transcripts (LATs) in a selected population of Colombian horses. Materials and methods. Serum samples, submandibular lymph nodes and trigeminal ganglion were obtained from 50 horses and analyzed. Sera were evaluated for the presence of antibodies against EHV-1 and EHV-4 while tissues were initially evaluated for the presence of viral genome by nPCR. Finally, samples were used for the detection of LATs through RT-PCR. Results. In general, 6/50 samples showed antibodies to EHV-1 and 44/50 were positive for EHV-4. As for viral genome detection, 10/50 samples were positive for EHV-1 and 30/50 were positive for EHV-4; in addition, 22/35 horses positive for EHV DNA were positive for LATs. The use of these tests led to eight possible combinations of results. Conclusions. The evidence used shows that horses can have simple viral infection, co-infections with both viruses, latency due to the presence of LATs and the simultaneous presence of LATs and viral genome replication at a given time. It contributes to the understanding of the behavior of the disease in Colombia and calls attention to the importance of implementing complementary diagnoses to the serology for the control of these viruses.

RESUMEN Objetivo. Determinar presencia de anticuerpos y genoma viral de EHV-1 y EHV-4, como también detectar la presencia de transcriptos asociados a latencia (LATs) en una población seleccionada de caballos colombianos. Materiales y métodos. Muestras de suero, nódulos linfáticos submandibulares y ganglio trigémino se obtuvieron de 50 caballos y fueron analizadas. Los sueros se evaluaron para la presencia de anticuerpos contra EHV-1 y EHV-4 mientras que los tejidos se evaluaron inicialmente para la presencia de genoma viral por nPCR. Finalmente, las muestras se emplearon para la detección de LATs a través de RT-PCR. Resultados. En general, 6/50 muestras mostraron anticuerpos para EHV-1 y 44/50 fueron positivos para EHV-4. En cuanto a la detección del genoma viral, 10/50 muestras fueron positivas para EHV-1 y 30/50 fueron positivas para EHV-4; además, 22/35 caballos positivos para DNA de EHV fueron positivos para LATs. El empleo de estas pruebas llevó a ocho posibles combinaciones de resultados. Conclusiones. Se confirma la presencia de estos virus en la población equina colombiana. Las pruebas empleadas demuestran que los caballos pueden tener infección viral simple, co-infecciones con ambos virus, estado de latencia debido a la presencia de los LATs y presencia simultánea de LATs y de replicación de genoma viral en un momento dado. Se aporta al entendimiento del comportamiento de la enfermedad en Colombia y se llama la atención sobre la importancia de implementar diagnósticos complementarios a la serología para el control de estos virus.

Cultivos celulares como alternativa para el aislamiento y la producción de biológicos contra el Virus de Influenza / Cell culture as an alternative for isolation and production of biologics against influenza virus

El virus de influenza ha sido reconocido como un importante patógeno en poblaciones humanas y animales, ya que es el principal causante de enfermedades respiratorias. Muchas vacunas y aislamientos de virus de influenza humana y animal son realizadas actualmente en huevos embrionados, siendo este el método usado tradicionalmente por décadas. Sin embargo, se han encontrado inconvenientes en la elaboración de vacunas ya que el proceso de fabricación es de capacidad limitada (se requiere aproximadamente un huevo para generar una dosis vacunal) y alta demanda tiempo, disminuyendo su habilidad para generar biológicos rápidamente en el caso de una pandemia. El empleo de líneas celulares continuas para la producción de vacunas virales nace como alternativa que ofrece diversas ventajas: (i) oportunidad de emplear células completamente caracterizadas y estandarizadas, (ii) producción y planeación permanente de vacunas y (iii) los biológicos pueden ser producidos de forma más rápida. El objetivo de esta revisión es analizar las diferentes alternativas empleadas en el cultivo y/o aislamiento de virus de influenza, enfatizando en el uso de cultivos celulares como sustrato para el aislamiento y la producciónc de biológicos destinados a la salud humana y animal.

Aislamiento delvvirus herpes bovino tipo 1 en bovinos del departamento de córdoba - Colombia / Isoation of boviine herpes virus type 1 from cattle in cordoba - Colombia

Objetivo. Realizar el aislamiento del virus herpes bovino tipo 1 (BHV-1) en ganado bovino con antecedentes de infertilidad. Materiales y métodos. A partir de 85 animales, provenientes de diferentes áreas rurales del departamento de Córdoba, Colombia, sin antecedentes de vacunación y con titulos neutralizantes contra la enfermedad de la rinotraqueitis bovina infecciosa (IBR) por seroneutralización, se escogieron dos toros y una vaca para hacer aislamiento de HVB-1. Los animales fueron inmunosuprimidos con Dexametasona, y se obtuvieron muestras con hisopos nasales, oculares y de lavado prepucial en los toros y vaginales en la vaca respectivamente. Resultados. Se observó un efecto citopático a las 3 horas después de la inoculación de las células MDBK con el lavado genital de la vaca y a las 24 horas en los toros, con exposición del efecto en "racimo" a las 48 horas. El aislamiento en ambos tipos de muestras, sugiere que la reactivación viral fue seguida por una fase de viremia y excreción del virus en las secreciones naturales. Conclusiones. El aislamiento del virus HVB-1 en los reproductores aparentemente sanos pero con títulos a la prueba de seroneutralización, establece la presencia de latencia viral en éstos animales, importante factor epidemiológico en la difusión de la enfermedad a nivel de campo. Se deben iniciar los estudios necesarios para establecer el subtipo de virus actuante en el campo, para conocer sus características antigénicas y su correspondencia con las cepas vacunales.

Objective. Bovine herpes virus type 1 (BHV-1) was isolated from beef cattle with history of infertility. Materials and methods. We chose 85 unvaccinated animals, from different rural areas of Cordoba Department that had evidence of infectious bovine rhinotracheitis (IBR) by serum neutralization. Two bulls and one cow were chosen to attempt isolation of HVB-1. The three bovines were immunosupressed with glucocorticoids (dexamethasone) and samples of prepucial washing (males) vaginal washing (female), and nasal and ocular swaps were obtained. Results. Cytopathic effect was detected 3 hours post-inoculation in the MDBK cells inoculated with vaginal washing of the cow and 24 hours post-inoculation in the cells inoculated with washings from the bulls. A "racime effect" appeared after 48 hours. Successful isolation from both types of samples, suggests that viral reactivation was followed by viremia and shedding of virus in natural secretions and excretions. Conclusions. The isolation of BHV-1 from apparently normal reproductive animals confirms the presence of viral latency in these animals. Latency is an important epidemiological factor in the spread of the disease among farm animals. Studies should be initiated to identify the viral subtype circulating understand its antigenic characteristics and match the virus to a vaccine strain.

Aspectos moleculares del virus de la parvovirosis canina y sus implicaciones en la enfermedad / Molecular aspects of canine parvovirosis and its consequences in the desease

El parvovirus canino tipo 2 (CPV-2)es el agente causal de una enfermedad infecto-contagiosa que produce una gastroenteritis aguda hemorrágica que afecta a caninos jóvenes. El CPV-2 se adaptó a la especie canina por mutación del virus de la panleucopenia felina (FPV)luego de su paso por los animales silvestres como el hurón y los zorros. La alta variabilidad de la proteina viral 2 (VP2) es la causa principal del amplio rango de hopedadores y las reacciones cruzadas entre las variantes. En la actualidad, la secuenciación de esta proteina ha permitido identificar tres variantes del virus conocidas como 2a, 2b y 2c que conviven en el mundo con diferencias en tropismo celular, infecciocidad y patogenecidad. El virus ssADN ha presentado una gran variación génica en cortos periodos de tiempo lo que indica un alto grado de selección por evolución solo comparable con virus RN, esta alta variabilidad no se ha aclarado totalmente. El empleo de las tecnicas moleculares permitira diferencial entre cepas vacunales y de campo, tanto como contar con técnicas diagnósticas confiables y especificas...

Las células madre mesenquimales desde la perspectiva de las ciencias veterinarias / The mesenchymal stem cells from the veterinary sciences perspective

Las características de una célula madre (stem cell) están determinadas por ser indiferenciadas, autorrenovables, y por tener la capacidad de generar células hijas para múltiples linajes celulares, con la capacidad de proliferar indefinidamente en cultivos. El origen de las células madre puede ser embrionario (blastómeros y células de la masa interna del blastocisto) o somático (células pluripotenciales de tejidos adultos). La fuente de las células madre somáticas es la médula ósea, en la cual se encuentran las células madre hematopoyéticas y las mesenquimales (MSCs). Diversos estudios en modelos animales han demostrado que MSCs constituyen una herramienta potencial para el establecimiento de terapias regenerativas en tejidos lesionados. Este artículo revisa las propiedades de las células madre, sus potenciales, sus ventajas y limitaciones en varios modelos animales.

Detección de biotipos del virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) a través de RT-PCR / Detection of Bovine Viral Diarrhea virus biotypes through RT-PCR

En el presente artículo se describe la normalización de la prueba de RT-PCR para ser empleada como herramienta en la detección del Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB). Los iniciadores utilizados amplificaron un sector de 280 pb que se encuentra dentro del extremo 5’ UTR del genoma viral. Para el proceso de normalización, se usó como control positivo, cepas de referencia de VDVB (NADL, Osloss). Para evaluar reacción cruzada se usó una cepa de virus de Enfermedad de las Fronteras (BD). La obtención del cDNA se realizó por el método de ®random primers¼ (iniciadores aleatorios). La prueba detectó tanto cepas citopáticas, como no citopáticas del VDVB. El protocolo establecido demostró un buen funcionamiento in vitro y es la base para posteriores pruebas de validación y evaluación de la prueba diagnóstica.